在生物医疗日常操作中，科研人员经常会遇到一些看似不健康的细胞：变圆、漂浮、不贴壁、颜色变暗、增殖缓慢等。许多人在此情况下会急于放弃这些细胞，认为它们无法存活。然而，您是否知道，这些处于“垂死挣扎”的细胞实际上有时只是处于假死状态，是可以恢复的。本文将深入探讨细胞状态差却仍有希望恢复生机的情形，旨在帮助科研人员减少不必要的浪费，节省宝贵的细胞资源。

一、变圆、漂浮≠死亡：细胞贴壁能力的辨析

许多贴壁细胞，如HeLa、293T、MCF-7，在健康状态下应牢牢附着在培养瓶底部。然而，当它们出现以下情况时，常被误判为死亡：

• 机械扰动、胰酶消化时间过长，导致细胞脱附。
• 复苏不久，细胞贴壁时间较长（一般需12~24小时）。
• 培养基不适或血清浓度过低，影响细胞粘附分子表达。

抢救措施包括：

• 静置培养瓶观察24小时，避免频繁晃动。
• 提高血清浓度（例如，10%提升至15%）。
• 使用多聚赖氨酸或明胶包被以增强贴壁能力。

二、颜色发暗、胞浆颗粒增多：可能是“应激状态”而非死亡

在显微镜下，细胞颜色发暗、出现胞浆颗粒或空泡，可能被误认为是坏死的迹象，但很可能细胞处于应激反应。例如：

• 培养基pH变化（颜色发黄或变紫）。
• 缺氧、营养不足、微生物感染。
• 长时间未更换培养液导致代谢产物积累。

抢救措施包括：

• 更换新鲜培养基，必要时加用Hepes缓冲剂维持pH。
• 检查是否有污染。
• 补加胰岛素、转铁蛋白、谷胱甘肽等抗应激因子以支持恢复。

三、增殖迟缓甚至停滞：可能是休眠状态而非死亡

细胞状态差时常表现为增殖缓慢，尤其见于初代细胞、iPSC类细胞或神经干细胞等敏感类型。这类细胞常因胞内调控机制失衡，进入休眠状态，如G0期停滞。

抢救措施包括：

• 补加细胞因子或小分子化合物（如bFGF、EGF、Y-27632）以刺激激活。
• 尝试低密度共培养与健康细胞，提高细胞间信号传导。
• 使用优化试剂包如StemFlex、Neurobasal-B27进行精准干预。

四、看似死光的冻存细胞：可能是复苏方法不当

冻存细胞复苏后贴壁率低，有时甚至看不到细胞，可能是操作手法问题导致的：

• 复苏后直接离心再更换培养基，造成机械损伤。
• 去除DMSO不及时或操作慢，毒性暴露时间过长。
• 培养基温度不合适，细胞进入休眠或凋亡。

抢救措施包括：

• 快速复苏（<1分钟37℃水浴），直接加入预热培养基稀释DMSO。
• 添加ROCK抑制剂Y-27632（10μM），可显著提升贴壁率与存活率。

五、染色看似“全死”的细胞也可能有生机

在使用台盼蓝（Trypan Blue）或PI染色判断细胞活性时，如果染色阳性较多，通常被视为死亡。但这也可能是因细胞膜暂时性破裂或染色时间过长造成假阳性。

抢救措施包括：

• 使用流式细胞术结合AnnexinV/PI染色以分辨凋亡与坏死。
• 继续培养观察细胞的贴壁与增殖情况，不要盲目丢弃。
• 考虑再培养12-24小时，部分细胞仍可恢复功能。

六、污染≠报废：某些污染是可控的

虽然严重污染（如真菌和细菌）需要立即报废，但轻度污染或早期污染是可以通过处理保住细胞的：

• 培养瓶表面霉点：可转瓶并加抗生素密切观察。
• 偶发颗粒状漂浮物：可能是血清蛋白析出或培养基变质，并非污染。

许多细胞状态不佳的情况实际上并非不可挽救。在日常细胞培养中，科研人员不仅依赖于经验判断，还需进行科学观察与合理干预。正如在科研领域面对挑战时一样，细胞看似无望并不等于失败。只要方法得当、处理及时，很多时候细胞都可以恢复活力。选择尊龙凯时(中国区)人生就是搏，让您的生物医疗研究得以更进一步。