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NEWS尊龙凯时(中国区)人生就是搏轻松选对His标签蛋白纯化填料指南
来源:公冶莲祥 日期:2025-02-19蛋白质纯化是重组蛋白生产过程中至关重要的下游环节。由于重组蛋白在化学和结构上的多样性,亲和标签技术逐渐成为高通量蛋白纯化的重要手段。它能够在复杂的背景中有效富集低丰度蛋白,从而不仅提高目标蛋白的产量,还赋予其新的特性。
在众多亲和标签中,His-Tag(通常由六个组氨酸残基组成)是目前最为常用的选项。该标签具有以下几项优势:分子量小且易于表达、免疫原性低,能够与其他标签组合、在洗脱时条件温和方便再生,且成本相对较低。通过与目标蛋白基因融合的His标签,能够成功获取纯重组多肽。
在纯化过程中,His标签与金属离子(如镍)的结合是关键。组氨酸中的咪唑环具有给电子体基团,可以与金属形成配位键。因此,通过调整标签蛋白与金属离子之间的相互作用强度,可以实现目标蛋白的有效纯化。通常在缓冲液中加入高浓度的咪唑,咪唑与His标签蛋白竞争性结合金属离子,从而将目标蛋白洗脱下来。另外,也可以通过调低缓冲液的pH值,减弱标签蛋白与金属离子的结合能力,以达到蛋白分离的目的。
面对His标签蛋白的纯化,尊龙凯时(中国区)人生就是搏提供了多种纯化产品,包括已预先鳌合Ni²⁺的NiBestaroseFF/HP及未预先鳌合金属离子的IMACBestaroseFF和ChelatingBestaroseFF。NiBestaroseFF是将金属离子Ni²⁺通过氨三乙酸(NTA)固定在交联的琼脂糖凝胶中的亲密层析介质,具有高载量和快速流速的优点。
IMACBestaroseHP/FF和ChelatingBestaroseFF则允许用户自主选择所需的金属离子(如Co²⁺、Cu²⁺、Zn²⁺、Ca²⁺等)进行偶联。ChelatingBestaroseFF提供三个配位位点,而IMACBestaroseFF则有四个配位位点,这使其在结合金属离子时的效率更高。因此,在选择纯化介质时,应根据具体的蛋白特性来做出合理的决策。
为了提高His标签蛋白的纯化效果,NiBestaroseFF的使用变得尤为重要。其高效的纯化能力和良好的操作性能,使其成为理想的选择。在纯化过程中,避免使用DTT、EDTA等强还原剂,以免干扰Ni柱的性能,建议事前对样品进行透析或脱盐处理。
尊龙凯时(中国区)人生就是搏的产品,如BestdexG-25M凝胶过滤填料,能够快速有效地进行脱盐和缓冲液置换,进一步增强His标签蛋白与Ni柱的结合力,为纯化过程提供了可靠的支持。这一系列的产品选择与优化策略,将助力实验室在生物医疗领域的研究和应用,推动重组蛋白技术的发展。
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