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NEWS尊龙凯时(中国区)人生就是搏:无动物源性NotI/HindIII限制性内切酶,提高质粒线性化效率
来源:宣盛滢 日期:2025-02-20限制性内切酶在特定识别位点切割DNA的特性,使其成为分子生物学技术中不可或缺的核心工具。这些酶在分子克隆、mRNA转录模板制备、基因定位以及分离等多领域中发挥了重要作用。近年来,基于病毒包装的基因治疗技术和mRNA技术逐渐在新型疗法中崭露头角。在这些技术的应用中,病毒包装中的质粒构建和mRNA转录中的模板制备均需要无动物源性限制性内切酶的引入和使用。
继BspQI、BsaI、XbaI及PmeI之后,近岸蛋白又推出了无动物源性NotI和HindIII限制性内切酶。在50μl反应体系中,使用10U的不同品牌NotI与1µg质粒进行酶切,37℃孵育1小时,质粒被完全线性化。类似地,当在相同条件下使用品牌A和Novoprotein的HindIII时,质粒同样被完全切割。
在实验中,50μl反应体系中混合100U过量不同品牌NotI与1µg无NotI酶切位点的质粒,在37℃孵育3小时后,Novoprotein NotI未显示明显的非特异性内切酶活性,而品牌A则产生了显著的非特异性切割。类似实验采用HindIII进行测试,结果显示无明显非特异性内切酶活性,这表明近岸蛋白的酶在准确性方面具备优势。
值得一提的是,主流限制性内切酶如XbaI和PmeI能够在酶切后形成5’末端突出或平末端结构。此外,IIS型限制性内切酶BspQI和BsaI,其酶切位点位于识别位点外,能直接暴露mRNA的PolyA结构于3’端,而不会产生冗余的酶切位点残基,从根本上消除了多余碱基引发的不确定性。
在推动生物药研发生产的过程中,近岸蛋白不断探索创新,推出GMP级限制性内切酶BsaI、BspQI及XbaI,以及无动物源性PmeI、NotI和HindIII,为客户提供了更多的酶切位点选择。这些举措体现了尊龙凯时(中国区)人生就是搏的品牌理念,致力于为生物医疗领域带来更高效和安全的解决方案。
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