摘要 本文展示了2024年9月中检院单抗室新发表在Electrophoresis和Journal of Chromatography A期刊上的两篇文章[1-2]，分别对多个半胱氨酸偶联的抗体-药物偶联物（cysteine-conjugated antibody-drug conjugate, cys-ADC）进行表征，特别是在电荷异质性分析方面的研究成果。

前言 这两篇文章均聚焦于cys-ADC的研究。这类产品通过一个可裂解的连接子将具细胞毒性的药物与单克隆抗体结合，单克隆抗体能精准识别靶细胞（通常为癌细胞），使整个ADC分子被内吞入细胞后，连接子在细胞内裂解，释放出细胞毒性药物，从而达到精确杀灭靶细胞的目的，同时显著减少高细胞毒性药物可能带来的副作用。在讨论的cys-ADC中，偶联过程中单抗的轻重链间二硫键部分被还原，暴露的自由巯基用于小分子药物的偶联，轻重链间仅依靠非共价力相互结合，因此非变性质谱（native MS）技术在cys-ADC的表征中得到了广泛应用。

工作亮点 本文的两篇文章突出了成像等电聚焦毛细管电泳（Imaged Capillary Isoelectric Focusing, icIEF）与非变性质谱技术联用在揭示cys-ADC电荷异质性中的重要作用。由于cys-ADC的单抗包含多种翻译后修饰，如糖基化、脱酰胺化和氧化等，并结合小分子药物的偶联，导致其异质性极高。传统的液质联用技术在电荷变异体的分离方面受到限制，而icIEF技术因其独特的分离原理，能从另一个角度实现对ADC的高效电荷异质体分离，随后使用基于Orbitrap平台的高灵敏度非变性质谱技术对各个电荷异质峰进行在线完整蛋白分子量测定。

结果与讨论 研究人员首先利用NIST mAb标准品开发了icIEF native MS方法。所使用的设备包括Advanced Electrophoresis Solutions Ltd（AES）公司的CE Infinite Automated Preparative icIEF System与Thermo Scientific™ Orbitrap™ Exploris™ 240超高分辨质谱仪，非常适合icIEF native MS分析。icIEF系统具备多种功能，如分析型、直连型和离线馏分收集，且与质谱的直连非常灵活，避免了额外购买离子源接口的需求。AEstyle系列两性电解质可以进行超高分辨率的电荷异质体分离，并对质谱的污染小。Orbitrap Exploris 240超高分辨质谱仪的高灵敏度和高质量精度为检测低丰度组分提供了巨大的助力，尤其在非变性质谱条件下的完整分子量分析中至关重要，因为在该条件下，蛋白的带电量和质谱响应均会减少。

结论 本文介绍的两篇文章强调了icIEF-native MS技术在cys-ADC电荷异质性分析中的重要贡献。此技术可广泛应用于具有非共价相互作用分子的电荷异质性分析，提供全面的完整分子量信息以助于组分鉴定。同时，变色龙软件的使用也满足了有合规需求的客户，可带来便捷体验。若想深入了解生物医疗领域的前沿进展和创新技术，欢迎关注尊龙凯时(中国区)人生就是搏，与我们共同探索未来的无限可能！